ПЦР на гепатит С

ПЦР — современная диагностика гепатита С

Вирусный гепатит С — одно из самых «коварных» заболеваний печени. Долгое время протекает бессимптомно, что приводит к хронизации процесса (в 80%). В большинстве случаев заканчивается фиброзом печени, перетекающим в цирроз или опухоль органа.

Особое значение приобретают методы ранней диагностики заболевания. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет поставить диагноз уже через несколько дней после инфицирования.

Коротко о вирусном гепатите С

Возбудитель — РНК содержащий вирус, имеющий несколько подтипов. Проникает в организм человека через кровь: половым путем, при переливании крови, инъекциях и других инвазивных медицинских манипуляциях.

Острая форма болезни не имеет значимых симптомов. Иногда отмечается тяжесть в правом подреберье, которую большинство пациентов не замечают.

Хроническая форма приводит к нарушению всех функций печени: интоксикация, боль в животе, желтуха, суставные боли и многие другие. На этом этапе процесс становится необратимым.

Часто хронический гепатит С становится предшественником злокачественного перерождения тканей печени.

Суть метода ПЦР

Методом ПЦР определяют вирусную РНК уже через 5 дней после заражения. В этот период иммунный ответ еще не запущен, результаты серологического исследования будут отрицательны, клинические симптомы полностью отсутствуют.

Именно ПЦР диагностика дает возможность поставить диагноз на ранней стадии заболевания, когда адекватное лечение значительно улучшает прогноз для больного. Различают два вида ПЦР — качественная и количественная.

Качественная методика

Обнаруживает генетический материал вируса гепатита С в минимальном количестве. Результат бывает двух видов:

1. «Обнаружено» — положительная реакция, означающая наличие заболевания у человека.
2. «Не обнаружено» — отрицательный анализ, который свидетельствует об отсутствии заражения или наличии вируса в таких малых количествах, которые не фиксируются данным методом. Это не дает 100% вероятности того, что вирусного гепатита С у больного нет.

Для анализа чаще всего используют кровь, но подходит и слюна, семенная жидкость, другие биологические жидкости.

Количественная методика

Это более сложный и дорогостоящий метод, который проводится по определенным показаниям:

1. Подтверждение диагноза при положительной качественной ПЦР и обнаружении специфических антител.
2. При сочетанной вирусной патологии (вирус гепатита С часто «соседствует» с гепатитом В, передающимся такими же способами).
3. Контроль эффективности проводимой терапии. Для этого выясняют уровень виремии до лечения, затем на 4, 12, 24 неделе терапии. Если на 12 неделе уровень содержания вируса не снижается на две логарифмические единицы, значит препарат подобран неверно.
4. Диагностика перехода острой стадии в хроническую.

В единице объема исследуемой жидкости (обычно в 1 мл) подсчитывают количество вирусных единиц. Результат выражается в МЕ/мл или количестве копий РНК вируса в 1 мл.

Он показывает интенсивность вирусной нагрузки на организм. Чем больше это значение, тем больше вероятность передачи вируса другим людям. Тяжесть поражения печени от уровня виремии не зависит. Для этого существуют многочисленные , так называемые, печеночные пробы.

Подготовка к исследованию

Большая часть ложноотрицательных анализов возникает из-за несоблюдения технологии проведения анализа. Чтобы избежать этого, нужно соблюдать следующие правила:

1. Полностью исключить попадание в биоматериал загрязняющих веществ (условия абсолютной стерильности).
2. Минимальная концентрация гепарина в крови, который используется для предотвращения свертывания или назначается больному в терапевтических целях, влияет на результат ПЦР. Важно заранее выяснить у пациента этот вопрос.
3. Не допускать попадание любых веществ из окружающей среды, которые нейтрализуют ферменты в тест-системах ПЦР.

Все эти требования касаются деятельности лаборантов и врачей. Пациенту специально готовиться не нужно. Обычно кровь сдают натощак, исключают алкоголь.

Преимущества ПЦР

В комплексном обследовании на гепатит С полимеразная цепная реакция стоит на первом месте за счет целого ряда преимуществ:

1. Непосредственное выделение возбудителя с возможностью идентифицировать его подтип. В остальных случаях (серологические реакции) исследуют реакцию иммунной системы на вирус.
2. Высокая специфичность методики. Вероятность получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов сведена к минимуму (в основном бывают при нарушении технологии проведения исследования).
3. Высокая чувствительность. Большинство лабораторий и тест-систем обеспечивают чувствительность не менее 50 МЕ/мл. Существует ультра ПЦР, в которой этот показатель 10 МЕ/мл. Это означает, что вирус гепатита С можно обнаружить в первые дни инфицирования.
4. Универсальность. Методом ПЦР выявляют сразу несколько возбудителей гепатитов при их наличии.

ВАЖНО! Вирусы с высокой изменчивостью генотипа (гепатита С, гриппа) «запутывают» иммунную систему, что приводит к нечетким показателям серологических анализов (выявляющих специфические антитела). Только ПЦР дает точный ответ о присутствии генотипа возбудителя в организме.

Трактовка результатов

ПЦР на гепатит С обычно проводится после серологических анализов на антитела. Наибольшие затруднения у пациентов вызывает трактовка количественного варианта метода. Попробуем разобраться в этом вопросе.

Если результат представлен в МЕ/мл, то результаты описываются следующим образом (данные приводятся для российского оборудования и тест-систем):

В таблице приведен вариант трактовки только для одного варианта российских тест-систем. Каждая лаборатория может использовать свое оборудование, дающее расхождение в значениях. Обычно результат выдается либо с готовой расшифровкой, либо с указание границ нормальных значений.

Особенности трактовки ПЦР

От правильной интерпретации результатов анализа зависит срок начала лечения, что в случае с гепатитом С жизненно важно для больного.

Существуют несколько факторов, влияющих на расшифровку результатов анализа:

• Качество аппаратуры и чувствительность тест-систем. На сегодняшний день наиболее распространены Cobas Ampicolor ВГС-Теst и РеалБест РНК ВГС. Их чувствительность не менее 50 МЕ/мл. Это означает, что если вирус присутствует в меньшей концентрации (например, в первые дни инфицирования), результат исследования будет отрицательный, а заболевание будет прогрессировать без лечения. Совсем недавно появились ультра чувствительные диагностические системы (не менее 10 МЕ/мл). Они значительно повышают качество диагностики. Стоимость такой ПЦР колеблется в широких пределах — от 1800 до 10 тыс. рублей в зависимости от лаборатории.
• Окончательный диагноз ставится только после трех разных исследований биологической жидкости. Если результат отрицательный три раза, то вируса гепатита С в организме пациента нет.
• Для успешного лечения необходимо не только подтверждение факта заражения вирусом, но и определение его подтипа: 1а, 1в, 2а, 2в, 2с, 3, 4, 5а, 6.
• Результаты оцениваются в двух единицах измерения: МЕ/мл и количество копий РНК/мл. Их цифры отличаются ровно в 4 раза, о чем нужно помнить, получая результаты анализа на руки.

Трактовка ПЦР реакции на вирусный гепатит С должна осуществляться специалистами. Врач разбирается в количественных показателях и сможет сравнить соответствие лабораторных результатов с клинической картиной.

Иногда бывают ложноположительные или ложноотрицательные варианты анализов, и только комплексное обследование пациента позволяет «не пропустить» это тяжелейшее заболевание печени.