ИФА анализ

ИФА анализ — диагностика инфекционных болезней

Главная проблема при лечении инфекционных заболеваний заключается в определении их возбудителей. От этого зависит правильный выбор специфических препаратов и быстрота выздоровления пациента.

ИФА —  иммуноферментный анализ крови

Достоверным экспресс-способом диагностики является иммуноферментный анализ (ИФА) крови. Он основан на выделении специфических антител, которые всегда образуются в организме на внедрение чужеродного агента.

Какие бывают антитела

Существуют пять типов антител: иммуноглобулины (Ig) класса A, M, G, E, D. Они образуются на разных стадиях иммунного ответа, поэтому служат не только для определения вида возбудителя, но и для выявления стадии заболевания (острая, хроническая, рецидив). Для понимания сути исследования коротко остановимся на принципах работы иммунной системы.

Стадии иммунного ответа

Когда в организме появляется антиген, которым выступает любой инфекционный агент (вирус, бактерия, простейшее) или собственные клетки, распознающиеся организмом как чужеродные, запускается сложная реакция иммунной системы.

В-лимфоциты трансформируются в плазматические клетки и начинают вырабатывать антитела различных видов:

1. Ig A — синтезируются клетками слизистых оболочек через две недели после попадания антигена. Большая часть концентрируется на слизистых дыхательных путей, пищеварительного тракта, мочеполовой системы. Только 20% циркулирует в крови и обнаруживается с помощью ИФА.
2. Ig M — образуются с пятого дня после начала иммунной реакции. Максимума достигают через 14 дней, затем постепенно уменьшаются и исчезают через 6 недель.
3. Ig G — основные «защитники», отвечающие за полное уничтожение антигена. Синтезируются через 2 недели и сохраняются в крови обычно на всю жизнь.
4. Ig Е — используются для диагностики паразитарных заболеваний.
5. Ig D — повышаются при иммунодефицитных состояниях, аутоиммунных процессах, при беременности.

Иммуноглобулины имеют свойство «склеиваться» с соответствующими антигенами, образуя комплексы Аг-Ат. Именно на выявлении таких комплексов с помощью биохимической реакции основан иммуноферментный анализ.

Трактовка ИФА (общие принципы)

В зависимости от сочетания различных типов иммуноглобулинов врачи делают выводы о стадии заболевания. Приводим характерные варианты в таблице.

Иммуноферментный анализ дает не только информацию о типе антител в крови, но и определяет их количество (титр). Для каждого заболевания есть свой титр антител, по которому судят о степени тяжести и остроте заболевания.

Как проводится ИФА

Исследование методом ИФА назначают в следующих случаях:

• Диагностика многих вирусных инфекций (герпетических, гепатитов, ВИЧ).
• Выявление инфекций, вызываемых бактериями (коклюш, туберкулез, дифтерия, сальмонеллез, бруцеллез, легионеллез). Все неспецифические воспалительные процессы, за которые отвечает кокковая флора (стафилококки и стрептококки) подтверждаются этим методом.
• Диагностика половых инфекций (сифилис, трихомониаз, хламидиоз, микоплазмоз, уреаплазмоз).
• В комплексной диагностике паразитарных инвазий (эхинококкоз, токсокароз, пневмоцистоз) и простейших (амебиаз, токсоплазмоз, криптоспоридоз).
• При аллергических реакциях и подтверждения некоторых опухолевых процессов.
• В эндокринологии для исследования гормонов щитовидной железы.
• Перед плановым хирургическим вмешательством.
• Для оценки эффективности проводимого лечения.

Чаще всего для анализа используется венозная кровь. Но существует ИФА околоплодных вод, жидкой части стекловидного тела, спинномозговой жидкости.

Подготовка к исследованию

В основе ИФА лежит биохимическая реакция, поэтому метод чувствителен ко многим факторам. Для получения достоверных результатов нужно придерживаться следующих правил:

• Кровь сдают только натощак (последний прием пищи за 12 часов, воду запрещено пить за час до анализа).
• За три дня прекращают прием алкоголя, курить не стоит за час до исследования.
• За несколько недель прекращают принимать антибиотики, противовирусные, антигистаминные и некоторые другие препараты. Полный список нужно уточнять у лечащего врача.

Перед забором материала человек должен успокоиться. Стрессы и тяжелая физическая нагрузка тоже искажают результаты.

Виды ИФА

В зависимости от технологии исследования выделяют три типа ИФА:

1. Прямой — в исследуемый биологический материал добавляют помеченные специфические антитела.
2. Непрямой — сначала антиген адсорбируется на полистирольном планшете, затем к нему добавляют специфические антитела и исследуют полученный комплексы Аг-Ат.
3. «Сэндвич»-тип, когда на планшете сорбируются не антигены, а антитела, а затем к ним добавляют антиген. Таким способом делают анализы на ВИЧ, гепатиты, герпес, токсоплазмоз, цитомегаловирус.

Антитела изначально помечают ферментом пероксидазой, а затем в кровь добавляют специфический хромоген. Это приводит к образованию окрашенного соединения.

Интенсивность цвета зависит от количества антител к данному возбудителю. Количественный подсчет проводят по специальным формулам.

Плюсы и минусы метода

Метод иммуноферментного анализа очень широко распространен в лабораторной диагностике различных заболеваний. Он имеет бесспорные преимущества:

• Небольшая стоимость, что дает возможность делать ИФА неоднократно, оценивая динамику болезни и эффективность терапии.
• Высокая точность, достигающая 90%. Для иммунологических методов это считается очень высокой чувствительностью.
• Быстрота получения результата. Экспресс-ответ дается уже через несколько часов. Иногда это может спасти жизнь пациенту.
• Возможность массового исследования в очагах инфекций во время эпидемий.
• Автоматическая обработка результатов, что сводит к минимуму субъективный фактор квалификации лаборанта.
• Малая инвазивность и полная безопасность для здоровья человека.

Эти преимущества позволяют начать специфическое лечение инфекционного заболевания на самых ранних стадиях, что значительно улучшает прогноз и скорость выздоровления.

ВАЖНО! Главный недостаток ИФА — вероятность получения ложноположительных результатов. Поэтому его никогда не используют как единственный метод подтверждения серьезных диагнозов: ВИЧ, сифилис, туберкулез и других.

ИФА на сифилис

Диагностика этого тяжелого заболевания с помощью ИФА осуществляется только на первом этапе — скрининговое исследование больших групп пациентов.

Вместе с реакцией Вассермана проводят при оформлении медицинской книжки, плановой госпитализации, беременности, диспансеризации и профилактических осмотрах.

С помощью иммуноферментного анализа выясняют время заражения и стадию болезни:

1. Ig M положительные — первичное заражение или обострение хронического процесса.
2. Ig A положительные — инфицирование более месяца назад, обычно острый процесс.
3. IG G положительные — при отрицательных Ig M свидетельствуют о недавно проведенном лечении, при положительных остальных классах антител — о разгаре болезни.

Если при ИФА прокрашивание комплексов на планшете не совпадает по интенсивности с контрольным, то говорят о сомнительном результате и назначают повторную процедуру.

Окончательный диагноз ставится только на основании комплекса лабораторных и клинических исследований.

ИФА на ВИЧ

Иммуноферментный анализ на ВИЧ входит в перечень стандартных первоочередных тестов. При его проведении следует учитывать деликатность проблемы и соблюдать конфиденциальность.

Сроки проведения должны учитывать наличие инкубационного периода (антитела не обнаруживаются), который при этой патологии очень разнообразный.

Исследовать кровь на ВИЧ нужно через 45-90 дней после предполагаемого инфицирования (незащищенного полового акта, переливания крови и других инвазивных медицинских манипуляций).

Алгоритм постановки диагноза ВИЧ на основании данных ИФА.

Такая сложная система перепроверки призвана полностью исключить диагностические ошибки, которые являются сильнейшей душевной травмой для пациента и могут закончиться трагически (известны случаи суицида при постановке этого диагноза).

Обнаружение хламидий

ИФА дает возможность подтвердить наличие хламидиоза, который часто протекает бессимптомно или имеет стертые проявления:

• Ig M выявляются уже через неделю после инфицирования.
• Ig А говорят о том, что инфекция «живет» в организме больше месяца.
• Ig G — хронический процесс. Так как этот класс Ат остается у человека на всю жизнь, следует различать само заболевание или постинфекционный иммунитет, сохраняющийся после успешного лечения. Для этого применяют количественную оценку результатов.

На этих же принципах основана и диагностика ЦМВИ — тяжелой герпетической инфекции, которая долгое время протекает бессимптомно, но при определенных факторах (беременность, снижение иммунитета) приводит к серьезному полиорганному поражению.

Диагностика паразитарных инфекций

В многочисленной группе инфекционных заболеваний существуют некоторые возбудители, которые относятся к труднодиагностируемым. Они вызывают стертую, неспецифическую клиническую картину.

Пациенты, имея незначительные отклонения в состоянии здоровья, не сразу обращаются за врачебной помощью. При таких инфекциях часто ставятся неверные или запоздалые диагнозы. В таких ситуациях ИФА является незаменимым методом диагностики.

По повышению уровня специфических Ig Е можно заподозрить наличие в организме следующих паразитов:

• Круглых червей (аскарид, остриц).
• Плоских червей из класса сосальщиков (описторхоз).
• Лямлий (дополнительный метод подтверждения диагноза).
• Трихинелл (круглых гельминтов, вызывающих опасное заболевание трихинеллез).
• Возбудителей лейшманиоза.
• Амеб (отвечают за развитие тяжелых воспалений слизистой оболочки толстой кишки, которую часто «путают» с более распространенными кишечными инфекциями).
• Токсоплазм.

Достоверность результата ИФА составляет 90%, что фактически является подтверждением заболевания при проведении дифференциальной диагностики с похожей по симптомам патологии.